慢性乙型肝炎（CHB）是导致肝细胞癌（HCC）的主要原因，而乙型肝炎病*（HBV）DNA整合是引发肝癌的分子机制之一。年美国肝病研究学会（AASLD）年会上，我国香港大学内科医学系王嘉豪教授等报告的一项研究发现长期NUC治疗有利于降低HBVDNA整合程度，进而降低CHB患者进展为HCC的风险；揭示了早期CHB患者需尽早开始治疗的重要性，具有重要临床和科学研究价值（摘要编号：22）。
HCC在全球癌症相关的死亡率中占第四位，CHB是导致HCC的主要原因。目前有效的抗HBV药物主要是核苷（酸）类似物（NUC），它们能有效抑制乙肝病*的复制，降低肝脏及血液内的HBVDNA含量。乙肝病*除了可以在肝脏内自由复制外，还可以将病*基因整合到乙肝患者肝细胞染色体内。乙肝病*DNA整合是引发肝癌的分子机制之一。硏究显示，乙肝病*DNA整合可以在早期的慢性乙肝患者中发现。
虽然NUC能抑制乙肝病*复制，但其能否降低乙肝病*向肝细胞DNA的整合仍尚未可知。因此，该项研究旨在探讨NUC治疗对乙肝患者HBVDNA整合程度的影响。
该硏究纳入了28例乙肝患者（男性21例，女性7例），平均年龄为40岁，其中14例为乙肝E抗原阳性，14例为HBeAg阴性。他们均接受了NUC治疗，其中11人接受拉米夫定治疗，7人接受替比夫定治疗，10人接受恩替卡韦治疗。该研究收集了所有患者在NUC治疗前和治疗一年后的肝脏活检组织，其中5人在接受NUC治疗10年后进行了额外的肝活检。
如表1所示，NUC治疗一年后，病例的5个乙肝病*学参数水平，包括血清HBVDNA、表面抗原（HBsAg)）、核心相关抗原（HBcrAg）、肝内HBVDNA和肝内环状共价DNA（cccDNA）均有所降低。NUC治疗10年后，所有这些参数均进一步降低。
表1.治疗后病*学参数的变化
*以上数据均为中位数（四分位间距）
此外，硏究也对肝脏活检组织中提取的DNA进行反向PCR以检测乙肝DNA整合。反向PCR之后，通过稀释、电泳和Sanger测序验证，确认乙肝DNA整合连接的存在后，计算每个连接的肝细胞克隆大小。肝细胞克隆大小反映了HBVDNA整合的程度。肝细胞克隆的大小越大，携带整合形式的HBVDNA的肝细胞越多。
在治疗前，所有28例患者均检测到HBVDNA整合。而肝细胞克隆大小与E抗原状态、病者年龄、血清病*量、肝脏HBVDNA和环状共价DNA水平之间并没有显著关联（图1），表明HBVDNA整合可能与HBV复制状态无关。
图1.肝细胞克隆大小和E抗原状态、年龄和治疗前病*学等参数之间的相关性
治疗1年后，所有28例患者仍检测到HBVDNA整合，但肝细胞克隆大小显著减少（治疗前克隆大小的中位数为1.4×对比治疗1年后6.72×；P=0.），平均减少42.5%（图2）。
图2.NUC治疗后肝细胞克隆大小减少
其中5例肝活检患者，在治疗后10年后，只在3例中检测到HBVDNA整合，而肝细胞克隆大小也有整体下降趋势（治疗前4.54×对比第1年2.62×和第10年1.00×；P=0.）。
该研究还探讨了肝细胞克隆大小的减少与病*学参数的减少之间的关系。肝细胞克隆大小减少与血清HBVDNA、表面抗原、核心相关抗原、肝内HBVDNA和肝内环状共价DNA的对数水平下降之间不存在相关性（图3）。这些数据表明，NUC治疗引起的克隆大小减少可能与其抑制HBV复制无关。
图3.血清和肝内病*学指标降低与肝细胞克隆大小减少的相关性
该研究在肝细胞染色体内找到了个独特的整合位点，大部分随机分布在整个基因组中。每个染色体的整合位点范围从2到30。为了将染色体长度对HBVDNA整合机会的偏倚计算在内，该研究把染色体长度作为HBVDNA整合位点数的标准化单位。标准化后，发现HBVDNA整合相对普遍发生在16、17、21和22号染色体中（图4）。
图4.HBVDNA整合位点在整个基因组中的分布
这项研究证实了HBVDNA整合发生在CHB感染的早期，并指出即使是1年的NUC治疗也可以显著减少被感染肝细胞的克隆大小，从而降低HBVDNA整合程度。长期的NUC治疗进一步降低了HBVDNA整合。尽管其潜在机制尚未阐明清楚，但这项研究表明长期NUC治疗有利于降低HBVDNA整合程度，从而降低CHB患者进展为HCC的风险。该研究发现还揭示了早期CHB患者需尽早开始治疗的重要性。
报告作者简介
王嘉豪
中国香港大学内科医学系助理教授
中国香港大学感染及免疫研究中心成员
中国香港大学肝脏研究国家重点实验室成员
（来源：《国际肝病》编辑部）
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